期刊简介
《中医临床研究》杂志是由中国科学技术协会主管，中华中医药学会主办，经国家新闻出版总署批准，国内外公开发行的国家级学术期刊。
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- 杂志名称：中医临床研究杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华中医药学会
- 国际刊号：15
- 国内刊号：1674-7860
- 出版周期：旬刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中)
人BMI-1基因真核表达载体构建及其在人乳腺癌细胞系MDA-MB-468细胞中的表达
王影利；邓青；尹玉慧；李惠翔
关键词：PcDNA3.1(+)-Bmi-1, BMI-1, 基因转染, MDA-MB-468, hTERT
摘要：目的:构建人Bmi-1基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Bmi-1,转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-468细胞中并检测其表达.方法:RT-PCR检测Bmi-1 mRNA在乳腺癌细胞系MCF-7及MDA-MB-468细胞中的表达水平;从MCF-7细胞中提取总RNA,逆转录为cDNA,以cDNA为模板,扩增Bmi-1基因序列,将含有Bmi-1全长编码序列的PCR产物经TA克隆后经PCR、酶切验证,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Bmi-1,转化至大肠杆菌后,酶切、测序鉴定;将重组质粒转染到MDA-MB-468中,48h后RT-PCR检测转染前后Bmi-1 mRNA及hTERT mRNA的表达变化.结果:Bmi-1 mRNA在MCF-7细胞中表达较高,而在MDA-MB-468细胞中仅适量表达.成功从MCF-7细胞中克隆获得Bmi-1基因并构建真核表达载体.转染后在MDA-MB-468中检测到Bmi-1 mRNA表达上调,其过表达上调hTERT mRNA的表达.结论:成功克隆和建立人Bmi-1基因真核表达载体;pcDNA3.1(+)-Bmi-1能在MDA-MB-468中表达;为进一步研究Bmi-1基因在细胞中的功能奠定了基础.
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